国家卫健委最新回应：新冠核酸频频“假阳性”，检验人如何破局？
近期，多家实验室频频爆出“假阳性”，这些新闻迅速破圈，被一些不怀好意的阴谋论者，裹挟不明真相的“吃瓜”群众，对国家的“动态清零”政策造成不良的舆论影响。
5月23日，国家卫生健康委医政医管局监察专员郭燕介绍：“尽管核酸检测的特异性为100%，但在实际工作中，实验室可能因实验过程的操作造成污染而导致假阳性。”
检测的准确性是所有检验实验室的生命线。而造成假阳性最主要的原因是核酸气溶胶污染问题引起。
下面就PCR实验室出现假阳性（核酸污染）的具体原因及应对措施分析如下：
一、核酸气溶胶污染的直接因素：
①PCR扩增产物的污染。
笔者认为，这是目前实验室引起的核酸污染最主要原因！
③待测样品被污染。
从核酸污染的分布来看主要在2个地方：
1，空气中的核酸气溶胶：弥散到实验室各个角落，比较棘手；
二、核酸气溶胶污染的间接原因：
1. 不合理的实验室建设
严格的PCR实验室应有标准的正负压系统及四分区，实验室应按照生物安全二级实验室及PCR实验室设计基本要求来建设。可参考的标准为《GB50346-2011建设标准生物安全实验室建筑技术规范》及卫健委下发的《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》。标准实验室如下图：
标准化PCR实验室（图片源于网络，侵删）
医疗口的实验室大多符合要求，在科研口和农业口的实验室应重视实验室的规范性建设！
另外，说些现行技术指导原则里面没有提到，也最容易忽视的风险点！
2. 生物安全柜：
现有技术指导原则，只要求了选择BSL-Ⅱ级生物安全柜，但并未规定具体型号。从临床经验来看，只有B2型生物安全柜可以用于加核酸模板。
A1型、A2型、B1型为70%气体通过HEPA过滤器再循环至工作区；B2型为100%全排放型，无内部循环气流。因此只有B2型可以用于加样（阳性对照）。因为HEPA过滤器并不能有效过滤气溶胶质粒。生物安全柜配置错误，在加样的时候，循环风很容易造成核酸气溶胶的形成，从而造成污染，且污染很难清除。
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分级 |
工作进风速度（m/s） |
循环风比例（%） |
排风比例（%） |
与排风系统的连接方式 |
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Ⅰ级 [1] |
0.36 |
0 |
100 |
密闭连接 |
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Ⅱ级 |
A1 |
0.38～0.51 |
70 |
30 |
可排到房间或设置排风罩 |
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A2 |
0.51 |
70 |
30 |
可排到房间或设置排风罩 |
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B1 |
0.51 |
30 |
70 |
密闭连接 |
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B2 |
0.51 |
0 |
100 |
密闭连接 |
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Ⅲ级 |
0.51 |
0 |
100 |
密闭连接 |
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不同型号的生物安全柜区别
3. 常见的消毒措施并不能有效降解核酸：
紫外灯能杀灭病毒，但是《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》指出，短片段的基因核酸对紫外线损伤不敏感。
常规消毒剂如酒精、碘化物、戊二醛类、季铵盐等虽然能杀菌，但是不能降解核酸，或降解效率较差。
尤其是酒精，它其实是核酸提取试剂中的一个组分。已知的消毒剂中，次氯酸盐类消毒剂可以一定程度的降解核酸，但是腐蚀性强，不能处理精密仪器及金属制品。
4. 那些容易忽视的操作细节：
4.1 处理样品时，手套贴合性不够，处理阳性样本时，造成其他样本污染。从而造成假阳性；
4.2 处理样本时，忘记更换tip枪头，造成样本交叉污染；
4.3 吸取阳性对照（质粒）没有遵循“慢吸快打”的原则（这个需要练习形成肌肉记忆），往往是“快吸快打”，造成阳性样品污染枪头，或者在生物安全柜循环风的影响下，造成气溶胶飞溅，污染加样区域。最好使用带有滤芯的枪头。
带滤芯枪头
4.4 加样区没有放置桌面垃圾桶：加完样品的tip枪头可能含有高浓度的阳性核酸靶标，如果乱丢弃，可能造成气溶胶污染；应把tip枪头丢入含有次氯酸溶液的桌面垃圾桶中。因为次氯酸容易挥发，因此应每天都要更换含氯消毒液！
桌面垃圾桶
5. 污染高风险区域：
在笔者的临床实践中，发现以下区域存在阳性污染的概率更大：
笔者在某实验室发生污染时，在不同区域分别采集10个样本，通过PCR扩增分析后，比较不同区域的阳性检出率。发现样品处理区的核酸提取仪与离心机污染的程度最高（8/10）。在临床实践中，移液器也是污染的高风险项。不同实验室的污染情况都是不一样的，就像这个世界上，幸福的家庭都一样，不幸的家庭倒是各有各的不幸。同理，规范的实验室都一样，污染的实验室各有各的污染情况。以上数据仅供参考。
三、PCR污染的监测
在日常实验室运行中，要时刻注意监测实验室的污染情况。了解实验室有无污染，污染原因，污染程度，以便采取有效措施，防止和消除污染。一般通过设置阴性质控品来监测污染情况。
1. 试验过程监测：
目前，多数试剂盒的阴性对照是在配置PCR反应液，上机扩增这一环节进行质控。没有对核酸提取进行质控。因此，每次开展试验应增加3个纯化水样品，分布于待检样品的前、中、后位次或棋盘法随机放置，参与核酸提取，扩增，保证实验从样品处理、核酸提取、扩增3个步骤的全过程的阴性监控。防止整个试验过程可能存在的阳性污染。
2. 日常实验室环境检测：
监控对象：实验室内的仪器设备、空气、物体表面：
环境监测：每个实验区放置10ml纯化水或生理盐水（敞口），1个小时后，取样200 μl。作为样品，参与提取、扩增，分析实验室环境是否存在气溶胶污染。
物体表面监测：物体表面擦拭取样：用棉拭子蘸取生理盐水，在实验室台面（尤其是四周死角）、仪器表面和内孔涂抹取样后放入约0.5 ml生理盐水中取样。作为样品，参与提取、扩增，分析物体表面是否存在气溶胶污染。
四、解决PCR实验室污染的方法：第二代PCR CLEANER 2.0策略
首先针对上述产生气溶胶污染的原因进行分析，从人员、硬件配置、物料、方法（SOP）、环境五个方面进行认真复盘，整改。这是保证实验室长治久安、不发生污染的基本前提。
（图片源于网络，侵删）
2. 发生污染时的处理：
发生污染处理措施根据污染的区域来源：空气中的气溶胶污染和吸附到仪器设备上的核酸污染物：
2.1 空气中的核酸气溶胶污染处理：
紫外线照射，无法降解200bp以下的短片段核酸，作用距离以及效果非常有限，并且容易产生处理死角。可以通过纳克生物研发的第二代非雾化原理的“PCR CLEANER 核酸气溶胶污染清除仪”对空气中的气溶胶进行清除！清除效率高，最快可2小时解决空气中的气溶胶污染问题！“她”更大的价值是，每天实验结束，打开仪器60~120分钟，能大大降低实验室的污染概率。毕竟，核酸气溶胶的污染，用于是预防大于治理！“不污染”才是最好的治理！
2.2 吸附在仪器设备耗材表面上的核酸污染处理：
（1）更换污染区的耗材（主要是吸头和离心管）、实验服工作服应用次氯酸盐溶液浸泡1小时后，进行洗涤处理；尽量使用一次性生物安全Ⅱ级防护服。
（2）可以选用没有腐蚀性，对试验人员及环境友好，无刺激的核酸清除剂，例如纳克生物推出的第二代核酸污染清除解决方案：“PCR核酸质粒气溶胶污染清除剂”主要原理是通过酶解作用，清除效果较强，比常见的强氧化剂（次氯酸盐）降解效果要好！更加安全！无腐蚀性，无致畸致癌性。该试剂可以处理易腐蚀的区域如：移液器、生物安全柜、离心机、传递窗等区域进行喷洒清除。
核酸清除剂（酵母耐热核酸降解酶）
（3）用次氯酸盐如84消毒剂（具有腐蚀性，不能用于金属制品）喷洒试验桌面、地面、墙面，20分钟后，用一次性吸水纸或者干净抹布擦拭干净。有效氯含量应不低于6g/L;
（4）打开实验室所有紫外灯（生物安全柜、传递窗、实验室等），12h后，打开通风系统，即可解除污染。
（5）注意：试验耗材、工作衣等进行121℃30分钟高压，虽然有一定的作用，并不能完全去除质粒核酸的污染。
相约英雄之城--南昌
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